Воеводина Л.Г., Исакова И.В. ПОКАЗАНИЯ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ, ИММУННЫХ, МОНОКЛОНАЛЬНЫХ СЫВОРОТОК ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ В ПЯТНАХ

Санкт-Петербург

На практике выявление группоспецифических факторов системы АВО в следах крови на вещественных доказательствах проводится, главным образом, двумя реакциями (реакцией абсорбции-элюции и реже - количественной реакцией абсорбции агглютининов - РАЭ и КРА).

Обе реакции имеют как положительные, так и отрицательные стороны. В 1970 г. было выпущено методическое письмо «Определение групп изосерологической системы АВО в пятнах крови малой величины методом абсорбции-элюции при помощи изосывороток альфа и бета», МЗ СССР, 1970 г. Ранее использовалась только КРА. Данное сообщение посвящено, в основном, РАЭ с сыворотками анти-А и анти-В. Нами были проведены экспериментальные исследования с целью выявления: преимуществ и недостатков трех видов сывороток, использующихся в РАЭ для выявления антигенов в следах крови; влияния предмета-носителя; влияния примеси выделений, содержащихся в следах крови; возможности лучшего определения антигенов в слабо насыщенных (старых) следах, с различной силой антигенов. Параметры реакций подобраны по образцам крови известных групп и контрольной марли, на которой приготовлены образцы. В реакцию вводили высушенные на марле образцы выделений (слюны) разных групп - выделителей и невыделителей антигенов системы АВО, смешанные пятна крови со слюной. Для всех сывороток с соответствующими тест-эритроцитами, используемыми в дальнейшем в реакции, подобран титр 1:128; применена фиксация объектов спиртом в течение 20 минут. Абсорбция (в течение 18 часов при 4оС) и продолжительность отмывания подобраны для сывороток по образцам крови и контрольной марле. Элюцию проводили в физиологический раствор в течение 30 мин. при 52°С. Со всеми образцами крови в РАЭ были получены отчетливые специфичные результаты. При использовании слабо насыщенных следов с моноклональными сыворотками результат реакции - сомнительный (при относительно свежих пятнах, срок до I месяца).

Все использованные экспериментальные пятна крови и слюны были приготовлены из «свежих» образцов, взятых в отделении и высушенных в надлежащих условиях. С образцами слюны невыделителей моноклональные сыворотки дали отрицательный результат - невыявление соответствующего антигена, что позволяет использовать эти сыворотки при некотором загрязнении предмета- носителя выделениями (борьба с влиянием предмета-носителя). Остальные сыворотки (гетероиммунные гемагглютинирующие и изосыворотки) выявляли соответствующий антиген в слюне невыделителя; они непригодны, в случае загрязнения предмета-носителя выделениями. В слюне выделителей с гетероиммуными сыворотками антигены выделений выявлялись соответствующим образом, не наблюдалась «блокада» антител. При использовании изосывороток и моноклональных (анти-А и анти-В) в части образцов антиген в РАЭ выявлялся, в других имела место полная или частичная «блокада» соответствующих антител сыворотки, что, очевидно, связано с присутствием в этом образце сильного антигена; кроме того, с таким образцом имела место «перекрестная» реакция с гетерологичной сывороткой.

В смешанных следах крови и слюны того же лица, являющегося невыделителем своего группового фактора, со всеми сыворотками были получены надлежащие результаты. В таких же следах крови со слюной от выделителей с гетероиммуными гемагглютинирующими сыворотками соответствующие антигены выявлялись достоверно; с изосыворотками и моноклональными (даже в случаях выявления соответствующих антигенов в раздельных пятнах) имела место блокада антител. В таких образцах выявлялся только антиген Н, хотя они были иной специфичности. Поэтому при работе с пятнами крови с возможной примесью выделений надо учитывать возможность невыявления группового фактора крови (как с изосыворотками, так и МКАТ) - ложно отрицательный результат.

В смешанных следах крови и слюны разных групп (слюна от невыделителя) групповые факторы крови выявляются четко; с гетероиммуными и изосыворотками в отдельных образцах выявлялись и антигены слюны, с моноклональными - только антигены крови.

В смешанных следах крови и слюны выделителей разных групп (не совпадающих с группой крови) со всеми тремя сыворотками выявлялись антигены крови и слюны.

При использовании изосывороток и МКАТ для определения группы крови в следах её на предмете-носителе, значительно загрязненном выделениями лица-выделителя другой групповой специфичности, может иметь место ложно положительный результат - выявление в пятне крови антигена не крови, а выделения - при блокаде соответствующих антител за счет "сильного" антигена, содержащегося на предмете-носителе. В то же время, агглютинин, содержащийся в крови пятна, связывается гомологичным антигеном выделений предмета- носителя, что снижает его блокирующее действие на антитела соответствующей сыворотки (снижение абсорбционной способности антигена). В элюатах из пятна наблюдается агглютинация тест-эритроцитов за счет антител, соединившихся при абсорбции с антигеном выделений; в контроле антиген остается более сильным и дает блокаду - отрицательный результат на заключительном этапе реакции.

Такая разница в результатах с различными сыворотками, очевидно, объясняется разным качественным составом тест-сывороток. Как известно, методическое письмо рекомендует использовать сыворотки в РАЭ с высоким титром - от 1:128 и выше, и создано это письмо для работы с изосыворотками. Известно, что антитела изосывороток (альфа-анти-А и бета-анти-В) являются антителами преимущественно класса IgM; в сыворотках с высоким титром присутствует то или иное количество антител класса IgG.

Сыворотки с моноклональными антителами (согласно аннотации) принадлежат к классу IgM. Гетероиммунные сыворотки, получаемые иммунизацией животных эритроцитами человека соответствующей специфичности, содержат больше антител класса IgG. Для реакции абсорбции- элюции антитела тест-сыворотки должны обеспечивать подвижную, средней силы связь. Антитела класса IgM дают прочную связь, а потому, в случае сильного антигена (выделения от выделителя), дают феномен «блокады», комплекс антиген + антитело не распадается при фазе элюции.

Антитела класса IgG - дают довольно слабые подвижные связи, которые легко распадаются, поэтому такие сыворотки практически не дают блокады; однако после абсорбции могут распадаться, не достигнув фазы элюции, легко перемываются.

Чтобы обеспечить необходимую РАЭ связь, создается избыток антител (сыворотки с высоким титром), чтобы не все валентности их были заняты для сывороток класса IgM (борьба с блокадой). Кроме того, антитела класса IgM плохо выявляют слабые свойства (недостаток антигенных детерминант - мало антител соединяется, соответственно мало выходит в элюат). Поэтому использование тех или иных сывороток в каждом конкретном случае для РАЭ зависит от выраженности антигена в пятне крови, влияния предмета-носителя, наличия примеси выделений, степени насыщенности пятна, «возраста» его, наличия или отсутствия микрофлоры.

Повышение чувствительности реакции ведет к уменьшению её специфичности, поэтому использование сывороток с высоким титром способствует проявлению влияния предмета-носителя, вызывает перекрестные реакции за счет микрофлоры в пятнах (табл. 1).

Во всех сомнительных случаях следует использовать различные методы фиксации, разные виды сывороток и титра их, учитывать влияние предмета- носителя, проверив его в количественной реакции абсорбции, как и само пятно, если позволяют его размеры (рис. 1). Укорочение срока абсорбции возможно лишь при сильном антигене крови в пятне, т.к. слабые свойства и ненасыщенные пятна не дадут достоверных результатов.

Таблица 1

Результаты экспериментального исследования при использовании различных сывороток для пятен крови и слюны (изолированных и смешанных) Объекты исследования Результаты при использовании разных сывороток Примечание изогемагг- лютини- рующие гетеро- иммунные МКАТ Слабонасыщенные следы крови + + сомнительный результат

Слюна невыделителя + + - МКАТ при влиянии предмета- носителя Слюна выделителя (-) , (+), неспецифич. + (-) , (+), неспецифич. Кровь + слюна невыделителя (одного лица) + + + Кровь + слюна выделителя (одного лица) - (блокада), выявление только а/г Н + - (блокада), выявление только а/г Н Кровь + слюна невыделителя (разных групп) кровь + слюна + (отдельные образцы слюны) кровь + слюна + (отдельные образцы слюны) кровь + слюна - Кровь + слюна выделителя (разных групп) кровь + слюна + кровь + слюна + кровь + слюна + Сильное влияние предмета-носителя (кровь в пятне - Ар. контроль предмета- носителя - В) Пятно - В Контроль(-) Пятно - А,В Контроль- В Пятно - В Контроль (-) Искать выделения

<< | >>

↑

Источник: В.А. Клевно, В.Д. Исакова. АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ ТРУПА /. 2008

Еще по теме Воеводина Л.Г., Исакова И.В. ПОКАЗАНИЯ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ, ИММУННЫХ, МОНОКЛОНАЛЬНЫХ СЫВОРОТОК ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ В ПЯТНАХ:

- Криминалистическая методика - Криминалистическая тактика - Криминалистическая техника - Обеспечение следствия - Основы криминалистики - Проблемы криминалистики - Работа с микрообъектами - Судебная медицина - Судебная экспертиза -