Губайдуллин М.И., Сафин Р.Я. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ ДАВНОСТИ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ

Проблема определения давности наступления смерти остается одной из центральных в судебной медицине. Использование ограниченного круга стандартных параметров, основанных на оценке ранних и поздних трупных изменений, при исследовании давности наступления смерти не позволяет точно и надежно оценить интервал времени после наступления смерти [10].

Большое распространение получили работы, основанные на изучении посмертных изменений клеточных элементов крови, которые могут быть применены для определения давности наступления смерти [4,5,6,7,8]. Однако, в работах, посвященных данной проблематике, не выявлено сведений об изменении функциональной активности клеточных элементов трупной крови и недостаточно исследованы изменения количественного состава фракций лейкоцитов. Учитывая то, что для повышения степени точности методов по определению давности наступления смерти организма необходимо использовать многофакторный анализ (оценивать достаточно большое количество показателей) [8], вытекает потребность в исследовании ранее неизученных аспектов трупной крови.

Исследования выполнены на 35 образцах крови, полученных путем забора шприцем из полости левого желудочка сердца трупов людей с достоверно известным временем и обстоятельствами смерти. Затем кровь в количестве 10 мл смешивалась с раствором гепарина в разведении 1:10 (из расчета 25 ЕД гепарина на 1 мл крови). Исследование материала проводилось сразу же после забора.

Изначально был произведен подсчет процентного содержания нейтрофильных лейкоцитов в полученных образцах крови.

Функциональная активность нейтрофилов оценивалась с помощью исследования фагоцитоза (на модели поглощения частиц латекса диаметром 1,7 мкм (108 частиц/мл), полученного из ВНИИСК Санкт-Петербург) с определением активности фагоцитоза (процент нейтрофилов, захвативших хотя бы одну частицу латекса), интенсивности фагоцитоза (число поглощенных микросфер латекса на один подсчитанный нейтрофил) и внутриклеточного кислородзависимого метаболизма (оценка интенсивности реакции спонтанного и индуцированного теста восстановления нитросинего тетразолия) [1].

Поученные данные подвергли стат. обработке с использованием пакета статистических программ "Statistica, version 6.0" компании StatSoft, Inc.

Результаты данных исследований представлены в виде табл. 1, из которой следует, что величины исследованных иммунных показателей трупной крови снижаются в посмертном периоде, в зависимости от давности смерти.

Отмечается постепенное снижение процентного содержания нейтрофильных лейкоцитов трупной крови с увеличением посмертного интервала времени. Это согласуется с данными ранее проведенных нами исследований на трупах лабораторных животных и крови живых людей, хранившейся in vitro [2,3], а также других исследователей, которые отмечают полное разрушение нейтрофилов крови в результате аутолиза на сроках 66-96 часов после наступления биологической смерти организма или хранения крови in vitro [4,6,7].

При анализе данных о функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов трупной крови было выявлено резкое снижение в посмертном периоде показателей внутриклеточного кислородзависимого метаболизма, особенно величин индуцированного НСТ-теста, а показатели фагоцитарной активности клеток снижались несколько медленнее.

Статистический анализ показал наличие значимых различий между значениями групп исследованных иммунологических показателей крови, в зависимости от давности наступления смерти организма, а также наличие отрицательных корреляционных связей между исследованными показателями трупной крови и временем, прошедшим с наступления смерти организма (при р < 0,05).

Таблица 1

Динамика изменений исследованных показателей нейтрофильных лейкоцитов трупной крови людей на различных этапах постмортального периода (M±m) Показатели Время забора крови от момента наступления смерти, часы: 9.0011.59 12.0017.59 18.0023.59 24.0035.59 36.0047.59 48.0071.59 более 72.00 Количество случаев. 1 5 6 12 7 2 2 Доля нейтрофильных лейкоцитов крови, %. 64,0 ±0,0 61,2 ±9,76 54,5 ±10,1 50,83 ±12,1 46,29 ±11,3 46,0 ±0,0 14,00 ±2,83 Активность фагоцитоза, % 44,0 ±0,0 40,80 ±15,1 38,33 ±10,6 36,67 ±11,9 29,71 ±9,83 17,00 ±12,7 5,00 ±1,41

Интенсивность фагоцитоза, ед. 1,44 ±0,0 0,76 ±0,37 0,59 ±0,22 0,84 ±0,48 0,58 ±0,27 0,21 ±0,18 0,07 ±0,01 Интенсивность реакции спонтанного НСТ-теста, усл. ед. 0,24 ±0,0 0,21 ±0,10 0,14 ±0,06 0,14 ±0,04 0,10 ±0,02 0,05 ±0,01 0,00 ±0,00 Интенсивность реакции индуцированного НСТ- теста, усл. ед. 0,60 ±0,0 0,48 ±0,22 0,37 ±0,11 0,31 ±0,09 0,18 ±0,05 0,09 ±0,01 0,01 ±0,01

В результате проведенных исследований было выявлено, что в нейтрофильных лейкоцитах крови после наступления биологической смерти происходят существенные изменения, динамика которых находится в зависимости от давности наступления смерти или длительности хранения крови в пробирке.

Полученные результаты в значительной степени расширяют существующие представления о динамике посмертных изменений в нейтрофильных лейкоцитах крови и могут иметь научно-прикладное значение в судебной медицине (возможность использования иммунологических методов исследования для определения давности наступления смерти).

Список литературы: 1.

Долгушин И.И. Нейтрофилы и гомеостаз/ И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. - Екатеринбург: УрО РАН, 2001. - 278 с. 2.

Сафин, Р.Я. Динамика изменения некоторых иммунологических показателей трупной крови в зависимости от давности наступления смерти организма / Р.Я. Сафин // Иммунология Урала. Материалы V конференции иммунологов Урала. - Оренбург, 2006 - С. 69. 3.

Сафин, Р.Я. Применение иммунологических методов исследования для определения давности наступления смерти / Р.Я. Сафин // Сибирский медицинский журнал. - 2007. - Т. 73. - № 6. - С. 18-21. 4.

Babapulle C.J. Cellular changes and time since death / C.J. Babapulle, N.P. Jayasundera // Med. Sci. Law. - 1993. - Vol. 33. - № 3. - P. 213-222. 5.

Bardale, R. Evaluation of Morphological Changes in Blood Cells of Human Cadaver for the Estimation of Postmortem interval / R. Bardale, P.G. Dixit // Medico-legal update. - 2007. - Vol. 7. - № 2. - P. 35-41. 6.

Comparison of morphological changes in white blood cells after death and in vitro storage of blood for the estimation of postmortem interval / H. Dokgoz, N. Arican, I. Elmas et al. // Forensic Science Int. - 2001. - Vol. 124. - № 1. - P. 25-31. 7.

Laiho K. Autolytic changes in blood cells and other tissues of human cadavers viability and ion studies / K. Laiho, A. Penttila // Forensic Science Int. - 1981. - Vol. 17. - № 2. - P.109-120. 8.

Mohammed, M. A. Blood changes as a possible tool for estimation of the postmortem interval. Thesis. [Электронный ресурс]. - Faculty of Medicine, Cairo University. - 2004. - Режим доступа: http://www.cdml.edu.eg. 9.

Querido, D. A preliminary study of changes in scalp impedance during the early post-mortem periods in rats / D. Querido // Forensic Sci. Int. - 1999. - Vol. 101. - P.123 - 130. 10.

The estimation of the death in early postmortem period / C. Henssge, B. Knight, T. Krompecher et al. - London : Edward Arnold. - 2002. - 271 p.