ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ НЕНАРКОТИЧЕСКИХ И НАРКОТИЧЕСКИХ АНАЛЬГЕТИКОВ

Злоупотребление наркотическими веществами относится к разряду наиболее важных социальных проблем. Постоянно ведутся поиски новых соединений по анальгезирующей активности, не уступающие, а по безопасности значительно превышающие препараты сегодняшнего дня.

Отравления вышеперечисленными препаратами, включая и смертельные, по данным Бюро судебно-медицинской экспертизы Северо-Западного региона имеют место в судебно-медицинской практике. Из-за отсутствия методов химико-токсикологического анализа буторфанола, декстрометорфана, кеторолака, диклофенака в вещественных доказательствах и биообъектах, в том числе при приеме совместно с другими наркотическими веществами, их обнаружение является проблематичным.

Буторфанол и декстрометорфан являются наркотическими анальгетиками, относятся к группе агонистов-антагонистов опиоидных рецепторов, по химической структуре представляют собой производные фенантрен- изохинолина. Кеторолак и диклофенак являются нестероидными противовоспалительными средствами, по химической структуре кеторолак относится к производным гетероарилуксусной кислоты, диклофенак - к производным фенилуксусной кислоты.

Нами была изучена зависимость влияния природы растворителя на эффективность экстракции буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака из водных растворов. В качестве экстрагентов использовались разные органические растворители и их смеси, наиболее часто применяемые в химико-токсикологическом анализе. Влияние среды на степень извлечения исследуемых веществ было изучено в интервале рН 2,0-12,0.

Сравнительный анализ буторфанола, декстрометорфана, кеторолака, диклофенака и других неопоидных и опоидных анальгетиков проводился с использованием ультрафиолетовой спектрометрии. УФ-спектры буторфанола, диклофенака, морфина и кодеина имеют близкие значения максимумов абсорбции, поэтому метод не может быть применен для анализа этих соединений при совместном присутствии без предварительного их разделения.

Для идентификации буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака, а также продуктов реакции буторфанола с дериватизирующими агентами (триметилсилильные и пентафторпропионильные производные) нами использовался метод хроматомасс-спектрометрии. Анализ проводился на квадрупольном хроматомасс-спектрометрическом комплексе Agilent Technologies. Установлено, что масс-спектры исследуемых веществ идентичны данным из литературы.

Разработаны условия определения буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака методом ВЭЖХ. Анализ проводился на высокоэффективном жидкостном хроматографическом комплексе НР-1100 с диодно-матричным детектором (ДМД), оснащенном микроколонкой Hypersyl ODS С18.

Разработанный нами метод ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта позволяет определять микроколичества лекарственных веществ в извлечениях из биологического материала и одновременно разделять, идентифицировать и производить количественное определение искомых веществ. Определение проводилось при максимумах поглощения для каждого препарата длинах волн в диапазоне концентраций 1-50 мкг/мл по предварительно построенным калибровочным графикам. Использование вышеуказанного метода позволяет определять изучаемые вещества в присутствии порядка 200 других лекарственных веществ.

Для количественного определения буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака нами также использовался метод ультрафиолетовой спектрофотометрии. в растворе кислоты хлористоводородной 0,1М при следующих длинах волн: буторфанол - 278 нм, декстрометорфан - 278 нм, кеторолак - 254 нм, диклофенак - 273 нм. Предварительно строились графики зависимости оптической плотности от концентраций искомых веществ в растворе, подчиняющиеся закону Бугера-Ламберта-Бера. Содержание веществ рассчитывалось с учетом произведенных разведений. Параллельно был разработан хроматоденситометрический метод количественного определения исследуемых веществ на пластинках «Сорбфил», расчеты производились по

калибровочным графикам. Результаты методов сопоставимы.

Разработанные методы анализа были апробированы на биологических жидкостях экспериментальных животных - белых беспородных крысах массой тела 180-220 г. Забор крови производили через 1 ч, мочу собирали в течение 24 ч. Изолирование из крови и мочи проводили с использованием натрия хлорида для осаждения белков. Для экстракции использовали прямой метод: для буторфанола - смесью растворителей хлороформ-изопропанол (9:1), для декстрометорфана - хлороформом при значении рН 12,0, для кеторола и диклофенака - хлороформом при значении рН 2,0.

На основании статистических данных препараты буторфанол, декстрометорфан, кеторолак и диклофенак могут быть отнесены к объектам химико-токсикологического исследования. Данные исследования могут быть использованы в практике химических отделений БСМЭ и химико- токсикологических лабораторий наркодиспансеров.

Список литературы: 1.

Веселовская, Н.В. Наркотики/ Н.В. Веселовская, А.Е. Коваленко- М..: «Триада-Х», 2000.-150с. 2.

Дегтерев, Е.В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе наркотических исильнодействующих веществ (обзор) / Е.В. Дегтярев, А.В.Гаевский, Е.А.Зенкова // Хим.-фарм. Журнал - 1998. - Т. 32. - № 5. - С. 48-54. 3.

Мелентьев, А.Б. Скриниг лекарственных наркотических веществ и их метаболитов методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором / A.

Б.Мелентьев // Проблемы экспертизы в медицине - 2002. -.№4. - С. 15-21. 4.

Савчук,С.А. Применение хроматографии и хроматомасс-спектрометрии для изучения фармакокинетики и метаболизма пропофола,клофелина,фенциклидина и и трамадола(обзор)./С.А.Савчук, Н.В.Веселовская, Е.С.Бродский, А.А.Формановский, B.

В.Чистяков, Б.Н.Изотов Б.Н. // Хим.-фарм. Журнал - 1999. - Т.33. - № 6. - С. 29-52. 5.

Электронная версия Jackson .Clark's Analysis.of Drugs and Poisons - London,

2006.

Годунов А.В., Волченко С.В., Киреева А.В., Федоров Д.Б.

ОБНАРУЖЕНИЕ 3-МЕТИЛФЕНТАНИЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ И ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ МЕТОДОМ ГХ / МС

Ленинградская область

Наиболее часто встречающимися наркотическими веществами в практике лаборатории являются опиаты, каннабиноиды, метадон, 3- метилфентанил, амфетамины и прочие.

3-метилфентанил обратил на себя внимание в связи с участившимся поступлением на исследование объектов, в которых не обнаружены другие наркотические вещества и этиловый спирт. Нередко в качестве вещественных доказательств доставлялись упаковки с неизвестным веществом в виде порошка. Кроме того, были приняты во внимание частые упоминания в средствах массовой информации об изъятиях у наркоторговцев наркотического вещества, сбываемого под наименованием «белый китаец». В доступной литературе методики определения в биоматериале 3-метилфентанила не найдено, поэтому мы разработали и внедрили в практику лаборатории метод обнаружения 3- метилфентанила. В качестве метода предварительного анализа применяли иммуноферментный метод.

Изолирование 3-метилфентанила проводили двумя способами: а). из крови, головного мозга и вещественных доказательств - методом жидкость- жидкостной экстракции смесью растворителей гексан-метиленхлорид- изопропанол; б). из мочи - методом твердофазной экстракции (Bond Elut LRC- Certify, 130 mg).

Сухие остатки растворяли в 250 мкл этилацетата, аликвоту вводили в систему ГХ/МС.

Условия анализа: Agilent 6890N - газовый хроматограф; Agilent 5973N- масс-селективный детектор; колонка HP-5MS 30м; скорость потока 1 мл/мин, газ-носитель гелий; режим ввода пробы: Pulsed Splitless, объем вводимой пробы 3 мкл; SIM ионы: m/z 160, m/z 203, m/z 259, m/z 260; режим анализа: Scan mode.

На хроматограмме выявлены пики, которые имеют сходные времена удерживания и масс-спектры со стандартными цис- и транс- изомерами 3- метилфентанила.

ИЗОЛИРОВАНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ БАРБИТУРОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КРОВИ МЕТОДОМ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗА

Санкт-Петербург

При диагностике отравлений наиболее информативной жидкостью является кровь, так как она позволяет судить о наличии и количественном содержании токсического вещества в организме в данный момент времени. Однако в области аналитической токсикологии эту биожидкостъ используют редко. Актуальным является вопрос стандартизации существующих методов изолирования токсических веществ из крови и выбора метода, который будет обеспечивать наибольшую степень изолирования и давать статистически достоверные результаты. Целью работы явилась валидация существующих методов изолирования производных барбитуровой кислоты из крови, а также разработка нового, более эффективного метода с использованием ферментативного гидролиза.

В судебно-медицинской практике смертельные отравления лекарственными веществами занимают 3-5 места среди всех отравлений. Одно из первых мест по числу смертельных отравлений занимают производные барбитуровой кислоты, а также их сочетания с другими препаратами. Наиболее часто встречаются отравления фенобарбиталом. При приёме внутрь производные барбитуровой кислоты полностью, но относительно медленно всасываются. Пик концентрации в крови наблюдается через 1—2 ч после приема. Около 50 % связывается белками плазмы.

Задача состояла в создании модели отравления на образце крови, по описанной в литературе методике, последующее изолирование рядом методов, наиболее часто применяемых в практике химико-токсикологического и судебно- химического анализа, статистическая обработка и сравнительная оценка полученных результатов.

Для моделирования поведения фенобарбитала в крови был использован метод, описанный в литературе Чегером: 2,5 мл крови настаивали в течение 1 ч при температуре 37°С с 2,5 мл раствора с концентрацией 1 мг/мл фенобарбитала в фосфатном буфере с рН = 7,4. Изолирование осуществлялось следующими методами: прямой экстракцией хлороформом, экстракцией хлороформом после осаждения белков 50% раствором ТХУ или 10% раствором натрия вольфрамата в среде 25% раствора серной кислоты после гемолиза крови. Количественная оценка выполнялась методом высокоэффективной жидкостной хроматографией на хроматографе типа «Аквилон-АЦП-133». Вычисление результатов измерений проводили с использованием хроматографической программы по градуировочной зависимости по площади хроматографического пика анализируемого вещества.

Статистическую обработку результатов вели по методике ГФ ХІ. Выход фенобарбитала при изолировании его из биологической жидкости методом прямой экстракции хлороформом составил 29,4 ± 7,1%, после гемолиза крови - 20,4 ± 4,2%, осаждения 50% ТХУ - 22,9 ± 6,9%, натрия вольфраматом - 27,3 ± 13,2%. В продолжение работы, выполненной на кафедре фармацевтической химии по изучению возможности применения ферментативного гидролиза для изолирования веществ, мы использовали методику ферментативного гидролиза на производных барбитуровой кислоты. Для подбора оптимальных условий сначала был применен гидролиз комплекса фенобарбитал - альбумин. Степень связывания фенобарбитала альбумином составляет 68,4 ± 8,77% (свободная фракция - 31,6%). Под действием пепсина - 38,6 ± 6,4%, трипсина - 55,7 ± 5,6%, химотрипсина - 52,7 ± 10%. В дальнейшем планируется опробовать этот метод на крови.