ДОКАЗАТЕЛЬСТВО МЕТОТРЕКСАТА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Санкт-Петербург

Метотрексат по химической структуре (^[4-[[(2,4-диамино-6-птеридил)- метил]-метиламино]-бензоил]-1-глютаминовая кислота) близок к фолиевой кислоте и является ее антиметаболитом-антагонистом.

Это цитостатическое средство, назначаемое при острых лейкозах, лимфосаркоме, при комбинированной химиотерапии у больных раком молочной железы, легких яичников и др.

Препарат применяют при тщательном наблюдении врача, так как его употребление вызывает ряд побочных явлений - тошноту, диарею, стоматит, а при длительном назначении - язвенные поражения слизистой оболочки полости рта с кровотечениями, выпадение волос, анемию, тромбоцитопению с общей кровоточивостью.

Выпускается в виде таблеток по 2,5; 5 и 10 мг, а также в виде натриевой соли - лиофилизированной сухой пористой массы, желтого (по 0,005 г) и от темно-желтого до желто-коричневого (по 0,05 и 0,1 г) цвета, растворимой в воде.

Применяют метотрексат внутрь, а также в виде натриевой соли внутримышечно, внутривенно и интратекально. При приеме внутрь в малых дозах максимальная концентрация метотрексата в сыворотке крови наблюдается течение 1-2 часов. Период полувыведения (Т1/2) составляет 4-10 часов, а объем распределения (Уё)-около 0,8 л/кг.

Около 50-95% дозы выводится в неизмененном виде с мочой в течение 24 часов. Основными метаболитами являются 4-амино-10-метилптериновая кислота, 7-гидроксиметотрексат и 7-гидрокси-4-амино-10-метилптериновая кислота.

Вследствие узкого терапевтического интервала действия (близости терапевтической (0,23 мкг/мл) и токсической (0,45 мкг/мл) концентрации) необходимо контролировать концентрацию метотрексата в течение всего периода лечения этим лекарственным средством.

Доказательство метотрексата в биообъектах при судебно-химическом исследовании, а также в крови при проведении терапевтического лекарственного мониторинга является достаточно сложной аналитической задачей, вследствие отсутствия методов изолирования, его физико-химических свойств и растворимости.

Препарат практически не растворим в воде, этаноле, хлороформе и эфире, что не позволяет применять для выделения его из биообъектов общепринятые в химико-токсикологическом анализе методы изолирования подкисленной водой или этиловым спиртом (для биотканей), а также прямой жидкость-жидкостной экстракции (для биожидкостей).

Нами разработана методика изолирования метотрексата из биологического материала, в основу которой положена растворимость этого лекарственного вещества в ацетонитриле.

Методика.

По 5 г измельченных внутренних органов и по 5 мл биожидкостей (кровь, моча) помещались в фарфоровые чашки и высушивались при комнатной температуре. Остатки заливались ацетонитрилом дважды по 15 мл. Извлечения отфильтровывались через бумажные фильтры, и фильтраты испарялись досуха. Полученные остатки исследовались ниже приводимыми методами.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Жидкостной хроматограф «Милихром 5». Колонка 80х2 мм с Сепароном С18 (7 мкм). Элюент - 40% раствор ацетонитрила на фосфатном буфере (рН 6,1), скорость элюента 100 мкл/мин. Детектор ультрафиолетовый, аналитическая длина волны 220 нм. Время удерживания метотрексата составляет 1,64 мин. При этом пик, соответствующий анализируемому веществу, имеет максимумы поглощения при 260 нм и 304 нм.

Ультрафиолетовая спектрофотометрия

Метотрексат в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты имеет максимум поглощения при 242,7 нм и 306 нм, а в 0,1 М растворе гидроксида натрия - при 258 нм и 303 нм.

Тонкослойная хроматография

Исследовано хроматографическое поведение метотрексата на пластинках «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» в 6 системах растворителей (табл. 1).

Значение hRf ( Rf*102) метотрексата

Таблица 1 № п/п Система растворителей Значение hRf* 1 Ацетонитрил:вода (1:1) 18 2 Ацетонитрил:вода (1:2) 86 3 Этанол :25% раствор гидроксида аммония (100:1,5) 15 4 Хлороформ:н-бутанол:25% раствор гидроксида аммония (70:40:5) 0 5 Этилацетат:метанол:25% раствор гидроксида аммония (17:2:1) 0 6 Бензол 0 Обозначено: * n = 3

Согласно данным, представленным в табл. 1, для идентификации метотрексата на пластинках «Сорбфил» могут быть использованы системы растворителей № 1, 2 и 3. Детекция метотрексата на хроматографической пластинке осуществляется по собственной желтой или оранжево-желтой окраске лекарственного вещества. С применением разработанной методики выполнено судебно-химическое исследование внутренних органов и мочи от трупа гр-на А. в связи с подозрением на отравление метотрексатом. По результатам выполненного исследования было сделано заключение об отсутствии в биообъектах (тонкий кишечник, печень, почка, стенка мочевого пузыря и моче) метотрексата.

Вместе с тем на основании судебно-химического анализа с применением хроматомасс-спектрометрии, ультрафиолетовой спектрофотометрии,

тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии в крови гр-на А. установлено присутствие сильнодействующего вещества - фенобарбитала, наркотического средства - тримеперидина (промедола) и лекарственных веществ - димедрола и флуконозола.

<< | >>

↑

Источник: В.А. Клевно, В.Д. Исакова. АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ ТРУПА /. 2008

Еще по теме ДОКАЗАТЕЛЬСТВО МЕТОТРЕКСАТА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ:

- Криминалистическая методика - Криминалистическая тактика - Криминалистическая техника - Обеспечение следствия - Основы криминалистики - Проблемы криминалистики - Работа с микрообъектами - Судебная медицина - Судебная экспертиза -